E-ロゼット形成
１．E-ロゼットの形成方法
T細胞や、NK細胞は、羊の赤血球（E）を、細胞表面に結合させ、E-ロゼット（E-rosette）を形成する。羊の赤血球（E）は、SRBC（sheep red blood cells）とも、略された。
E-ロゼットを形成させるには、予め、羊の赤血球を、ノイラミニダーゼ（Test Neuraminidase：N-acyl-neuraminyl-glyco-hydrolase, 3.2.1.18 from Vibrio comma）で処理して置く。ヘパリンを、血液1ml当たり50単位加えて、血液を採取し、試験管（Falcon 2095 Tube等）の中で、Ficoll-Hypaque液に重層させ、比重遠沈法（比重遠心法：1,500〜20,00rpm、30分）にて、中間層の単核球層を採取する。
良く攪拌し（ピペッティグする）、37℃15分間incubateする。その後、1,000rpmで5分間遠沈して、単核球とSRBCとを密着させた後、氷水中で、1時間、反応させる（ノイラミニダーゼで処理したSRBCを用いた場合、23℃でも良い）。
その後、試験管の底面に遠沈した細胞（MNC＋SRBC）を、静かに、ピペッティグにて、浮遊させる。浮遊液を、1滴、スライドガラスに落とし、カバーグラスをかけて、顕微鏡で観察し、ロゼットを形成した単核球の百分率を、求める。
モノクローナル抗体により、表面マーカー（表面抗原）の検査が行われるまでの時代は、白血病細胞などを分類する際、E-ロゼット形成細胞（E-rosette forming cells）をT細胞、細胞表面に蛍光抗体法で免疫グロブリンが存在する細胞をB細胞と、識別した。
CD2（LFA-2）は、羊の赤血球の受容体（E-ロゼットレセプター）。NK細胞やCTL表面のCD2（LFA-2）は、標的細胞のCD58（LFA-3）のリガンドとして、標的細胞との接着に関与する。CD2（LFA-2）は、CD48、CD59のレセプター（受容体）でもある。
NK細胞も、高率にCD2（LFA-2）を有していて、T細胞同様に、E-ロゼットを形成するが、低親和性と言われた。
２．LCL
EBウイルス（Epstein-Barr virus：EBV）は、唾液を介して、経口感染し、B細胞に感染する。EBウイルスは、B細胞表面のCD21をEBVリセプターにして、また、MHCクラスII分子を補助リセプターとして、感染する。EBウイルスは、B細胞以外にも、CD21を有さない、T細胞やNK細胞にも、感染する。
EBウイルスに感染したB細胞は、通常のウイルスに感染した細胞と同様に死滅することもあるが、EBウイルスに感染したB細胞は、形質転換（トランスフォーメーション、不死化）し、試験管内の培養液中で、癌細胞のように、継続的に細胞増殖する。
このように、ＥＢウイルスに感染して形質転換したB細胞は、形態的には、活性化B細胞のように芽球化するので、リンパ芽球様細胞株（lymphoblastoid cell line：LCL）と呼ばれる。
LCL（不死化細胞）は、9種類のウイルス蛋白質（EBNA2、LMP1など）と、3種類のRNAを、発現している。LMP1は、NF-kB、ATF-2、PI3K（phosphatidyl inositol 3 kinase）などの細胞転写因子を介して、CD40、CD11a/CD18（LFA-1）、CD58（LFA-3）、ICAM-1などの遺伝子を活性化させる。
日本人では、２歳までにに60％以上の人がEBウイルスに感染し（EBウイルスに対する抗体が陽性になる）、また、14〜16歳までには、約90％の人がEBウイルスに感染する。
EBウイルスは、一度、感染すると、他のヘルペス系ウイルスと同様に、B細胞内に、終生潜伏感染する。
日本人の多くは、EBウイルスに対する抗体（EBV-VCA-IgG抗体など）が陽性で、体内に、EBウイルスに感染した細胞を有している。
EBウイルスに感染して、EBウイルスに対する抗体（EB-VCA-IgG抗体など）が陽性の人は、EBウイルスに感染したB細胞を、末梢血B細胞106個当たり、1〜50個有している。
３．E-ロゼット形成細胞を除去して、B細胞を培養すると、LCLが樹立される
E-ロゼット形成させた後、再度、Ficoll-Hypaque液に重層させ、比重遠沈すると、E-ロゼット形成細胞（T細胞）は、試験管底に沈み、中間層のnon-T細胞（≒B細胞）を採取する。
non-T細胞を、FCSを加えたRPMI1640液（培養液）にて、培養すると、EBウイルスにより形質転換された（transformed）B細胞株（Bリンパ芽球：lymphoblastoid cell lines：LCL）が、樹立されることが多い。
このようなLCLは、癌細胞と同様に、試験管内では、無期限に増殖を繰り返すので、長期継代培養が可能なことが多いが、EBウイルスの種類によっては、他のウイルスのように細胞破壊的に作用し、長期継代培養出来ないこともある。
４．EBウイルスと疾患
EBウイルス（EBV）は、唾液を介して、感染する。EBウイルス（EBV）に初感染しても、不顕性感染で終わることもある。
EBウイルスに、乳幼児が、初感染すると、2〜8週間の潜伏期間の後、軽い感冒様症状や、扁桃腺炎の症状を発症することがある。
EBウイルスは、水痘など他のヘルペス系ウイルスと同様に、初感染時期が遅いと、重症な経過を辿る傾向がある：EBウイルスに、年長児や、成人が、初感染すると、伝染性単核症（infectious mononucleosis：IM：伝染性単核球症）として発症することが多い。
伝染性単核症は、発熱、咽頭痛、リンパ節腫脹を３主徴とする：伝染性単核症は、EBウイルスが、キスなどにより、唾液を介して経口感染した後、3〜5週間の潜伏期間の後、発症する。伝染性単核症では、発熱（38℃以上の高熱が、１〜2週間続く）、扁桃腺炎（白色の膿が帯状に付着する滲出性扁桃腺炎、注３）・咽頭炎、頚部リンパ節腫脹（約90％の症例に見られる）、肝脾腫（約60〜90％の症例に見られる）、眼瞼浮腫（20〜30％程度の症例に見られる）、発疹、関節などを来たす。
伝染性単核症では、病初期に、EBV-VCA-IgM抗体（生後18カ月以下の患児では陽性にならないことも多い）や、EB-VCA-IgG抗体,が陽性だが、EBNA抗体は、陰性。回復期には、EB-VCA-IgG抗体価が上昇する。EBNA抗体は、3〜6カ月程後に、陽性化する。
単純ヘルペスウイルスや、水痘帯状疱疹ウイルスの治療に用いられるACV（ビラックス）は、EBウイルスの複製を抑制する。
ACV（ビラックス）は、伝染性単核症（IM）患者の口腔へのウイルス排出量を低下させるが、伝染性単核症の臨床経過を改善しない。
５．EBウイルスの腫瘍原性
EBウイルス（EBV）は、感染したB細胞を形質転換（トランスフォーム）し、腫瘍細胞のように増殖させる腫瘍原性がある（oncogenic virus）。
１）．Burkitt lymphoma
赤道アフリカ地方の小児が多く発症するBurkitt lymphoma（endemic BL：eBL）は、90％以上が、EBウイルス陽性。eBLは、下額に好発するが、骨髄転移を起こしにくい。
マラリア感染は、HIVと同様に、リンパ球の増殖を促進し、胚中心を拡大させる。マラリア感染は、リンパ球増殖を促進させ、EBウイルスによるeBL発症を促進させる（マラリア感染が、免疫力を低下させ、EBウイルスの腫瘍原性を高め、BLを発症させると考えられた時期もあった）。
２）．ホジキンリンパ腫
ホジキンリンパ腫（Hodgkin lymphoma：HL）では、特徴的な、Hodgkin細胞や、Reed-Sternberg細胞（RS細胞）と言われる腫瘍細胞が、見られる。（ホジキンリンパ腫：左頚部リンパ節）
ホジキンリンパ腫は、近年の研究により、B細胞由来のBリンパ腫であると結論された。
伝染性単核症（IM）の経過中にRS細胞様の細胞が出現する。
伝染性単核症（IM）の既往がある人は、ホジキンリンパ腫の発症率が、有意に高い。
1987年に、（ホジキンリンパ腫の）腫瘍細胞中にEBV DNAが検出された。
ホジキンリンパ腫は、組織型によりEBV陽性率が異なる。
Reed-Sternberg細胞（RS細胞）は、EBNA1、LMP1、LMP2A、LMP2B、EBER、BARTを発現しているが、EBNA2は発現していない（陰性）で、EBNA1遺伝子の転写には、プロモーターはQpを用いる（EBV遺伝子発現パターンは、ＩＩ型）。
表 EBV遺伝子発現パターンとEBV関連疾患（参考文献の藤原氏の表２を改変し引用） EBV遺伝子発現パターン Ｉ型 ＩＩ型 ＩＩＩ型 EBV遺伝子発現 EBNA1 ＋ ＋ ＋ EBNA2 − − ＋ EBNA3A〜3C − − ＋ EBNA-LP − − ＋ LMP1 − ＋ ＋ LMP2A/B − ＋ ＋ EBER ＋ ＋ ＋ BART ＋ ＋ ＋ プロモーター活性 Qp ＋ ＋ − Cp/Wp − ＋ ＋ EBV関連疾患 バーキットリンパ腫（BL）、
胃癌慢性活動性EBV感染症（CAEBV）、
ホジキンリンパ腫（HL）、
鼻性T/NK細胞リンパ腫
LPD（リンパ増殖性疾患） ６．CD
CDは、cluster of differentiationの略。CD分類は、ヒト血液細胞上の分子（抗原）の、国際的な分類法になっている。
1970年代後半から、白血球表面の分子（抗原）に特異的に結合するモノクローナル抗体が、各社（各研究グループ）から、発売された。
モノクローナル抗体のLeuシリーズは、Becton Dickinson社が、開発した。OKTシリーズは、Ortho社が開発した。
しかし、各社により、異なる名称が付けられた為、これらのモノクローナル抗体を、国際的に分類して、統一した名称を付けるために、CD分類が、始まった。
７．免疫不全とEBウイルス感染
免疫不全の患者が、EBウイルスに初感染すると、EBウイルスにより形質転換されたB細胞（リンパ芽球様細胞株：LCL）が、体内で、白血病細胞の様に、無制限に増殖し、リンパ節、肝臓、腎臓など、多臓器に浸潤して、致死的な経過を辿ることがある。
注１：PBS（リン酸加生食、リン酸緩衝生理食塩水溶液）の作製は、NaCl 8.0g、KH2PO4 0.2g、Na2HPO4・12H2O 2.9g、KCL 0.2gに、蒸留水（aq）を加え、全量を1Lとする。
注２：培養液のRPMI1640液（pH6.8）には、1L当たり、Hepes 25ml、ゲンタマイシン（GM） 10mg、メイロン 28mlを添加する。
リンパ球幼若化反応（Blastformation）は、培養液（RPMI1640液）に、リンパ球（単核球）を1×106/mlに浮遊させて、レクチンで刺激する場合には、Con A 10〜40μg/mlか、PHA-P 15μg/mlを添加する。LPSは、10μg/mlの濃度に添加する。
リンパ球混合反応（MLR）は、刺激に用いるアロのリンパ球を、予め、培養液（RPMI1640液）に浮遊させ、マイトマイシンC（MMC） 40μg/mlを添加し、37℃で、45分間培養する（増殖を抑制する）。
インドメサシン（indomethacin）は、原末40mgを、100％エタノール4mlに溶解し、培養液（RPMI1640液）で希釈し、1μg/mlに調節する（10-7mol/ml）。
注３：伝染性単核症（伝染性単核球症）では、扁桃腺に白色の膿が付着し、一見、化膿性扁桃腺炎の像を呈することが多い。また、軟口蓋に、出血性の粘膜疹が見られ、咽頭痛が出現することが多い。
白色の膿が付着しているが、綿棒でスワブして細菌を検査（咽頭培養）しても、病原菌は、検出されない。しかし、伝染性単核症の扁桃腺から、混合感染により、同時に、A群溶血性連鎖球菌（溶連菌）が検出されることもある（1/3の伝染性単核症の症例に、溶連菌性扁桃腺炎を合併している）。
伝染性単核症でも、溶連菌感染症でも、発疹が見られる：伝染性単核症による発疹は回復期に、溶連菌感染症による発疹は急性期に見られる。
滲出性扁桃腺炎（化膿性扁桃腺炎）は、EBウイルス以外に、アデノウイルス、エンテロウイルス、単純ヘルペスウイルス（HSV）等のウイルス性扁桃腺炎でも、見られる。アデノウイルスは、扁桃腺、アデノイド、腸組織、膀胱組織などに、数ヶ月から数年の期間、潜伏感染し、時に、少量のウイルスを排出し、他の固体に、感染する。アデノウイルスによる扁桃腺炎は、白色の膿（滲出物）が、点状、線状、ないし微慢性（べったり）に、扁桃腺の表面に付着する。
滲出性扁桃腺炎（化膿性扁桃腺炎）の細菌培養で、インフルエンザ菌、肺炎球菌、ブドウ球菌等が検出されても、扁桃腺炎の原因（で起炎菌）ないことが多い。細菌培養で、溶連菌（A群溶血性連鎖球菌）が検出された場合も、菌数が少ない場合は、起炎菌でないことが多い。
小児の滲出性扁桃腺炎（膿のような滲出物を伴なう扁桃腺炎）の原因は、ウイルスが原因の場合が42％（内45％はアデノウイルスが原因）、溶連菌（A群溶血性連鎖球菌）が原因の場合が12％と言う報告もあると言う。滲出性扁桃炎（152検体）から分離されたウイルスは、A型インフルエンザ（FluA）が7例、C型インフルエンザ（FluC）が3例、パラインフルエンザウイルスが5例、RSウイルス（RSV）が3例、ヒトメタニューモウイルス（hMPV）が2例、ライノウイルス（Rhino）が1例、アデノウイルスが19例、エンテロウイルスのコクサッキーAウイルス（CoxA）が5例、コクサッキーBウイルス（CoxB）が15例、エコーウイルス（Echo）が19例、単純ヘルペスウイルス（HSV）が6例だったと言う報告もある（板垣等）。
咽頭培養（咽頭ぬぐい液）では、非感染時も、α連鎖球菌、γ連鎖球菌などの非病原常在菌のみならず、インフルエンザ菌、肺炎球菌など保菌状態にある細菌も、検出される（常在していて、宿主の免疫力が低下した際に、増殖して、病原性を示すことがある）。
急性咽頭炎の原因となるウイルスには、アデノウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、コクサッキーウイルス、パラインフルエンザウイルス、インフルエンザウイルス、RSウイルス、単純ヘルペスウイルス（歯肉口内炎、アフタも伴なう）、HHV-6やHHV-7（突発性発疹）、EBウイルス、サイトメガロウイルスなどがある。
滲出性扁桃腺炎（化膿性扁桃腺炎）で、点状の膿栓が見られる時には、エンテロウイルスや、A型インフルエンザウイルス（FluA）や、C型インフルエンザ（FluC）や、パラインフルエンザウイルス（Para）が原因のことが多く、線状ないし微慢性（べったり）の膿栓が見られる時には、アデノウイルスが原因のことが多い。
参考文献
・宮坂信之、他：わかりやすい免疫疾患 日本医師会雑誌 特別号（１） 生涯教育シリーズ−６７、2005年．
・谷口克、他：標準免疫学（第２版、医学書院、2004年）．
・岸本忠三、他：岩波講座 免疫科学３ 免疫担当細胞（岩波書店、1986年）．
・矢田純一：E（赤血球）リセプター 免疫学１ 免疫担当細胞 リンパ球表面レセプター、220-225, 1981年（中山書店）．
・藤原成悦：EBウイルス感染症をめぐる新しい状況と研究の進展 （第108回日本小児科学会学術集会 教育講演） 日本小児科学会雑誌 109巻12号、1417-1424、2005年．
・赤羽太郎、青山香喜、柳沢光彦：特集・新しい臨床検査 リンパ球のSubpopulation 小児科診療 第45巻・第6号、39-46、昭和57年（診断と治療社）．
・柳沢光彦、青沼袈裟佐賜、天野芳郎、市川元基、小宮山淳、赤羽太郎：培養ヒトT4+T細胞の形態と機能−Recombinant IL-2とアロ抗原刺激による長期培養− 組織培養 14(3): 26-30, 1988年．
